產(chǎn)品規(guī)格 ： 微量法/48樣
檢測(cè)原理 ：熒光法
測(cè)定意義
測(cè)定土壤丙氨酸氨基肽酶活性不僅是揭示土壤氮轉(zhuǎn)化微觀過(guò)程的“探針”，更是綜合評(píng)價(jià)土壤生物活性、肥力功能及環(huán)境壓力的實(shí)用工具。它在農(nóng)業(yè)可持續(xù)發(fā)展、環(huán)境污染防控和生態(tài)系統(tǒng)研究等領(lǐng)域具有重要的應(yīng)用價(jià)值，為土壤資源的科學(xué)管理提供關(guān)鍵依據(jù)。
測(cè)定原理
S-AAP分解L-AMC-丙氨酸，產(chǎn)生熒光物質(zhì),通過(guò)測(cè)定熒光值升高速率來(lái)計(jì)算S-AAP活性。
自備用品
酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、恒溫培養(yǎng)箱、可調(diào)式移液器、黑色96孔板和蒸餾水。
試劑組成和配制
試劑一：液體60mL×1瓶，4℃保存；
試劑二：粉劑×1瓶，-20℃避光保存(臨用前加入0.24mL試劑三溶解后加入11.76mL蒸餾水混勻)；
試劑三：液體8mL×1瓶 ,常溫避光保存；
標(biāo)準(zhǔn)品：粉劑×1瓶，-20℃避光保存。
樣品處理
新鮮土樣自然風(fēng)干或37度烘箱風(fēng)干，過(guò)30~50目篩。按照土壤質(zhì)量（g）：試劑一（mL)為1： 5~10 的比例（建議稱取約0.1g土壤，加入1mL試劑一），冰浴勻漿混勻3min，制成
勻漿待測(cè)液。
測(cè)定步驟
1、熒光酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，設(shè)置激發(fā)光波長(zhǎng) 355 nm，測(cè)定波長(zhǎng) 450nm。
2、加樣表
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試劑名稱
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測(cè)定管
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空白管
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震蕩條件下取勻待測(cè)液（μL）
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200
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-
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蒸餾水（μL）
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-
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200
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試劑二（μL）
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200
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200
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混勻， 30℃避光振蕩反應(yīng)3h后， 3000g 4℃離心3min，取上清液200μL于黑色96孔板中，檢測(cè)熒光值，激發(fā)波長(zhǎng)355nm，發(fā)射波長(zhǎng)450nm。熒光值分別為A測(cè)定A空白，計(jì)算ΔA=A測(cè)定管-A空白管。
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預(yù)實(shí)驗(yàn)的意義
比色法檢測(cè)試劑盒預(yù)實(shí)驗(yàn)非常重要
1、確定該試劑盒是否適合客戶的樣本檢測(cè)，以免造成試劑盒和樣本的浪費(fèi)（比如低表達(dá)處理的樣本）；
2、熟悉生化試劑盒的操作流程，尤其是初次使用生化試劑盒測(cè)定；
3、確定樣本的處理方法及稀釋倍數(shù)是否合適；
4、了解實(shí)驗(yàn)過(guò)程中可能出現(xiàn)的實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象或問(wèn)題，以便于及時(shí)作出調(diào)整；
5、通過(guò)3 - 5組預(yù)實(shí)驗(yàn)，判斷試劑盒對(duì)于樣本的最佳適應(yīng)稀釋濃度范圍，指導(dǎo)實(shí)驗(yàn)樣本稀釋比例。
注意
正式測(cè)定前務(wù)必取 3 - 5 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定。
