英文名稱 ：Caspase-8Activity Assay Kit
儲存條件 ：-20℃
產(chǎn)品包裝 ：盒裝
檢測方法 ：比色法
有 效 期 ：6個月
產(chǎn)品規(guī)格 ：20T 、50T 、100T
產(chǎn)品組成：
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試劑名稱/規(guī)格
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20T
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50T
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100T
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保存條件
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試劑一
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液體20mL×1瓶
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液體20mL×1瓶
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液體25mL×1瓶
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-20℃保存
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試劑二
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液體30mL×1瓶
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液體60mL×1瓶
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液體120mL×1瓶
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-20℃保存
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試劑三
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液體0.25L×1支
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液體0.55mL×1支
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液體0.55mL×2支
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-20℃保存
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標(biāo)準(zhǔn)品
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液體1mL×1支
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液體1mL×1支
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液體1mL×1支
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-20℃保存
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產(chǎn)品說明：
Caspase是參與細(xì)胞凋亡過程的蛋白酶家族，包含10多個成員。Caspase-8也稱FLICE、MACH或Mch5，通常以酶原的形式存在，凋亡時激活，被認(rèn)為是細(xì)胞凋亡轉(zhuǎn)導(dǎo)過程的上游caspase。在Fas-receptor和TNFR-1介導(dǎo)的凋亡過程中caspase-8被激活形成二聚體，進(jìn)而激活下游caspase-4、6、9、10。
本試劑盒測定原理基于Caspase-8特異水解其多肽底物Ac-IETD-pNA(N-acetyl-Ile-Glu-Thr-Asp-p-nitroanilide)，釋放出游離的硝基苯胺pNA，后者呈黃色在405nm具有大吸收峰，采用可見光光度比色法進(jìn)行測定。其吸光度值對應(yīng)于Caspase-8的水解活性。
注意：實驗之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計/酶標(biāo)儀、100μL玻璃比色皿/96孔板、臺式離心機、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、可調(diào)式移液器、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水。
注意事項：
1、由于試劑二中含有還原劑（DTT），建議將樣品用水稀釋2倍后，用Bradford法測定蛋白濃度，以降低DTT對蛋白濃度測定的干擾。不建議使用BCA法測定蛋白濃度。
2、Caspase活性測定值低常見的原因是細(xì)胞未發(fā)生凋亡或細(xì)胞量太少，其次是觀測時間不恰當(dāng)。誘導(dǎo)凋亡時，并非劑量越大時間越長Caspase活性就越高。建議設(shè)置不同劑量和時間點如0、2、4、8、16、24小時，以檢測佳的觀察點。
3、所測樣本的值高于標(biāo)準(zhǔn)曲線上限時，可用試劑二稀釋樣本后重新測定。
4、蓋緊96孔板蓋子并用封口膜密封。37oC孵育，肉眼可見顏色變黃時的OD405值約為0.2，此時即可測定。顏色變化不明顯可延長反應(yīng)或過夜，但酶活性較強時，孵育時間過長將導(dǎo)致反應(yīng)失去線性關(guān)系。
