英文名稱 ：Caspase-6Activity Assay Kit
儲存條件 ：-20℃
產(chǎn)品包裝 ：盒裝
檢測方法 ：比色法
有 效 期 ：6個月
產(chǎn)品規(guī)格 ：20T 、50T 、100T
產(chǎn)品組成：
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試劑名稱/規(guī)格
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20T
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50T
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100T
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保存條件
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試劑一
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液體20mL×1瓶
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液體20mL×1瓶
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液體25mL×1瓶
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-20℃保存
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試劑二
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液體30mL×1瓶
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液體60mL×1瓶
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液體120mL×1瓶
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-20℃保存
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試劑三
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液體0.25L×1支
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液體0.55mL×1支
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液體0.55mL×2支
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-20℃保存
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標準品
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液體1mL×1支
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液體1mL×1支
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液體1mL×1支
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-20℃保存
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產(chǎn)品說明：
Caspase是參與細胞凋亡過程的蛋白酶家族，包含10多個成員。Caspase-6也稱Mch-2，其前體蛋白被granzymeB剪切后形成活化的caspase-6二聚體，可誘導細胞凋亡。Caspase-6可剪切凋亡的關鍵調(diào)節(jié)蛋白PARP，剪切核膜上關鍵蛋白LaminA，其對于LaminA的識別位點是VEID。
本試劑盒測定原理基于Caspase-6特異水解其多肽底物Ac-VEID-pNA(N-acetyl-Val-Glu-Ile-Asp-p-nitroanilide)，釋放出游離的硝基苯胺pNA，后者呈黃色在405nm具有大吸收峰，采用可見光光度比色法測定。其吸光度值對應于Caspase-6的水解活性。
注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計/酶標儀、100μL玻璃比色皿/96孔板、臺式離心機、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、可調(diào)式移液器、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水。
注意事項：
1、由于試劑二中含有還原劑（DTT），建議將樣品用水稀釋2倍后，用Bradford法測定蛋白濃度，以降低DTT對蛋白濃度測定的干擾。不建議使用BCA法測定蛋白濃度。
2、Caspase活性測定值低常見的原因是細胞未發(fā)生凋亡或細胞量太少，其次是觀測時間不恰當。誘導凋亡時，并非劑量越大時間越長Caspase活性就越高。建議設置不同劑量和時間點如0、2、4、8、16、24小時，以檢測佳的觀察點。
3、所測樣本的值高于標準曲線上限時，可用試劑二稀釋樣本后重新測定。
4、蓋緊96孔板蓋子并用封口膜密封。37oC孵育，肉眼可見顏色變黃時的OD405值約為0.2，此時即可測定。顏色變化不明顯可延長反應或過夜，但酶活性較強時，孵育時間過長將導致反應失去線性關系。
