NB16 人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞
細(xì)胞鑒定 ：STR 鑒定已通過
細(xì)胞來源 ：國外
細(xì)胞背景 ：1990 年建立于 35 個月的神經(jīng)母細(xì)胞瘤（IV 期）日本女性患兒。
細(xì)胞特性 ： 形態(tài)：淋巴母細(xì)胞樣，懸浮生長。
用 途： 僅供科研使用。 培養(yǎng)條件
注意事項
1）準(zhǔn)備準(zhǔn)備 1640培養(yǎng)基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，15%；雙抗，1%。
2）培養(yǎng)條件： 空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為 70%-80%。
一. 消毒靜置等細(xì)胞穩(wěn)定后拍照 100X 和 200X。棄去培養(yǎng)上清，用 PBS 潤洗細(xì)胞 1-2 次并吸走。
二. T25 瓶加入 0.25％EDTA 胰蛋白酶 1-2ml 于培養(yǎng)瓶中震蕩混勻，如果屬于貼壁不牢固的細(xì)胞很容易脫落的就培養(yǎng)箱外面消化震蕩待脫落 90%以上終止消化，一般小于 1 分鐘以內(nèi)，甚至不加胰酶有部分貼壁非常不牢固的細(xì)胞也會自然震蕩脫落。如果是貼壁牢固的細(xì)胞則置于 37℃培養(yǎng)箱中消化提高效率，每 40-50 秒拿出培養(yǎng)箱震蕩幫助細(xì)胞脫落，如脫落 90%以上則對應(yīng) 3-6ml 含有 10%血清的完全培養(yǎng)基終止徹底，以防胰酶殘留損傷細(xì)胞。如果貼壁非常牢固的細(xì)胞，脫落的比例比較低，也不超過 2 分鐘后終止消化徹底，再加入 1ml 完全培養(yǎng)基讓細(xì)胞緩沖后再過 2 分鐘進(jìn)行二次消化，反復(fù)分步消化以降低單次消化時長，減少刺激，保護(hù)細(xì)胞膜。或采用刮產(chǎn)刮細(xì)胞的方式處理也可以。總歸原則是達(dá)到消化目的的同時減少細(xì)胞膜受到的損傷越小越好。
三. 消化完成后輕輕吹勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 3-5min，棄去上清液，補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。將細(xì)胞懸液按 1：2 的比例分到新 T25 瓶/6cm 培養(yǎng)皿中，添加 6-8ml 按照說明書要求配置的新的完全培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長活力，后續(xù)傳代根據(jù)實際情況按 1:2 和以上比例進(jìn)行，具體以實際細(xì)胞密度決定。期間多的細(xì)胞一定保存多份細(xì)胞凍存管備種。
大多數(shù)懸浮細(xì)胞對于環(huán)境比較敏感，建議一直維持高密度生長，一般情況下細(xì)胞密度維持在 1×10 5 到 1×10 6個/mL（不同細(xì)胞對密度要求不同）。如需分瓶可以將細(xì)胞懸液收集到離心管中 800-1000rpm，離心 5min，棄去上清，補加 1-2mL 培養(yǎng)液后重懸混勻后將細(xì)胞懸液按 1：2 的比例（首次可以 1:1 分瓶）分到新 T25 瓶中，添加5-6ml 按照說明書要求配置的新的完全培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長活力，后續(xù)傳代根據(jù)實際情況按 1:2 和以上比例進(jìn)行。大多數(shù)血液類相關(guān)的懸浮細(xì)胞受運輸影響比較大，會出現(xiàn)一批死細(xì)胞，如果因此密度降低了，可以離心后轉(zhuǎn)移至 T25 瓶中豎著培養(yǎng)，培養(yǎng)基添加 5ml 以提高總體密度，隔一天后觀察密度可以的話再補液 3ml 完全培養(yǎng)基后 T25 瓶放倒，等沉淀穩(wěn)定后觀察細(xì)胞密度，持續(xù)添加培養(yǎng)基等密度上升足夠傳代為止。 運輸形式 常溫發(fā)貨：收到后 T25 瓶消毒再放置培養(yǎng)箱靜置 2-3 小時后觀察密度和狀態(tài)拍照 2-3 張反饋給銷售，密度達(dá)標(biāo)就可以傳代。前期傳代比例 1:2，等再次長滿后傳代時建議凍存其中一整瓶成 1 個 1ml 凍存管，另外一瓶繼續(xù)傳代，
反復(fù)凍存 2-3 只后才擴(kuò)增做實驗，以防突發(fā)情況引起斷種。
干冰發(fā)貨：
常規(guī)細(xì)胞發(fā)貨凍存管 2 只，復(fù)蘇 1 只，另外一只備用，第一個復(fù)蘇不成功時嚴(yán)格按照廠家要求復(fù)蘇第二個，均沒有復(fù)蘇成功的情況即時留存復(fù)蘇照片通知銷售。
1. 所有動物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內(nèi)操作，并請注意防護(hù)，所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。
2. 建議在復(fù)蘇凍存細(xì)胞時始終使用防護(hù)手套、衣服和戴上防護(hù)面罩。注意：凍存管浸沒在液氮中會泄漏，并會慢慢充滿液氮。解凍時，液氮轉(zhuǎn)化成氣相可能導(dǎo)致容器爆炸或用危險力吹掉其蓋子，從而產(chǎn)生飛揚的碎屑造成人員傷害。
