英文名稱 ：Caspase-2 Activity Assay Kit
儲(chǔ)存條件 ：-20℃
產(chǎn)品包裝 ：盒裝
檢測方法 ：比色法
有 效 期 ：6個(gè)月
產(chǎn)品規(guī)格 ：20T 、50T 、100T
產(chǎn)品組成：
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試劑名稱/規(guī)格
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20T
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50T
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100T
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保存條件
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試劑一
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液體20mL×1瓶
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液體20 mL×1瓶
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液體25 mL×1瓶
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-20℃保存
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試劑二
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液體30 mL×1瓶
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液體60 mL×1瓶
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液體120mL×1瓶
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-20℃保存
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試劑三
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液體0.25L×1支
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液體0.55mL×1 支
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液體0.55mL×2支
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-20℃保存
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標(biāo)準(zhǔn)品
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液體1mL×1支
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液體1 mL×1支
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液體1 mL×1 支
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-20℃保存
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產(chǎn)品說明：
Caspase 是參與細(xì)胞凋亡過程的蛋白酶家族，包含10多個(gè)成員。Caspase-2 也稱 Ich- 1 或 Nedd-2，在細(xì)胞凋亡的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)過程中被激活。Caspase-2的mRNA 具有兩種不同剪切變體，其全長mRNA翻譯的蛋白可促進(jìn)凋亡， 而短蛋白產(chǎn)物則可抑制凋亡。
試劑盒測定原理基caspase-2特異水解其多肽底物N-acetyl-Val-Asp-Val-Ala-Asp-pNA (Ac-VDVAD-pNA)， 釋放出游離的硝基/苯胺 pNA，后者呈黃色在405nm具有大吸收峰，用可見光分光光度比色方法測定。其吸光度值對(duì)應(yīng)于 Caspase-2 的水解活性。
注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者 增加樣本量進(jìn)行檢測。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、 100μL 玻璃比色皿/96 孔板、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、可調(diào)式移液器、研 缽/勻漿器、冰和蒸餾水。
注意事項(xiàng)：
1、由于試劑二中含有還原劑（DTT），建議將樣本用水稀釋 2 倍后， 用 Bradford 法測定蛋白濃度，以降低DTT對(duì)蛋白濃度測定的干擾。不建議使用 BCA 法測定蛋白濃度。
2 、Caspase 活性測定值低常見的原因是細(xì)胞未發(fā)生凋亡或細(xì)胞量太少，其次是觀測時(shí)間不恰當(dāng)。誘導(dǎo)凋亡時(shí)， 并非劑量越大時(shí)間越長 Caspase 活性就越高。建議設(shè)置不同劑量和時(shí)間點(diǎn)如 0、2 、4 、8、16、24 小時(shí)，以檢 測佳的觀察點(diǎn)。
3、所測樣本的值高于標(biāo)準(zhǔn)曲線上限時(shí)，可用試劑二稀釋樣本后重新測定。
4、蓋緊96 孔板蓋子并用封口膜密封。37oC孵育， 肉眼可見顏色變黃時(shí)的 OD405 值約為0.2，此時(shí)即可測定。顏色變化不明顯可延長反應(yīng)或過夜，但酶活性較強(qiáng)時(shí)，孵育時(shí)間過長將導(dǎo)致反應(yīng)失去線性關(guān)系。
